双糖残基在肺癌组织学的检测

　　一、材料和方法

　　1.材料选自我院近年来手术切除的肺大体标本182份，其中肺恶性肿瘤95例（腺癌36例、鳞癌40例、小细胞癌14例、类癌4例、恶性纤维组织细胞瘤1例）;其他非肺恶性肿瘤87例，包括肺结核41例，支气管扩张12例，肺脓肿12例，肺曲菌球感染7例，肺囊肿7例，肺其他良性疾病8例。肺癌组年龄30～74岁，平均51.8岁，男女性别比3∶1；非肺癌组年龄7～66岁，平均35.8岁，男女性别比1.5∶1。

　　2.标本常规甲醛固定石蜡包埋制片（厚5 μm），半乳糖氧化酶试剂购自Sigma化学公司（G-740010 000 units，Lot85H6847）。染色参照Abulkalam等［1］及Xu等［2］半乳糖化酶-Schiff试剂方法加以改进：（1）石蜡切片脱蜡，置蒸溜水浸洗10 min；（2）0.1 mol/L、pH 7.0的磷酸钾缓冲液浸洗10 min;（3）用上述缓冲液配制的半乳糖氧化酶液（100 u/ml）37℃孵育4～5 h；（4）蒸馏水洗10 min（其中换2次水）；（5）与Schiff试剂反应20～30 min，（6）自来水冲洗10 min；（7）Harris苏木素染色1～2 min；（8）1%盐酸酒精分化数秒，然后自来水冲洗，常规脱水透明中性树胶封片。镜下观察：于胞质、腺腔内出现红色产物者定为阳性。

　　二、结果

　　1．95例瘤组织检测为阳性仅见于腺癌，其阳性率为36.11%（13/36），鳞癌、小细胞癌等均阴性，阳性产物位于腺癌胞质、腺腔缘及腺腔的粘液中。

　　2．肺癌支气管断端检测有意义者（粘膜组织结构完整者）85例，阳性率71.76%（61/85），阳性产物位于粘膜下腺体的胞质及腺腔粘液中，由数个细胞到数个腺体不等，粘膜上

　　皮细胞阴性。尽管鳞癌、小细胞癌等瘤组织阴性。但其支气管断端粘膜下腺体为阳性。

　　3．非肺癌病例87例，检测病变肺支气管断端及病灶阳性率71.26%（62/87）。阳性产物位于病灶中残存的腺体及支气管粘膜下腺体，也由数个细胞到数个腺体不等，而粘膜上皮阴性。

　　4.肺癌和非肺癌病变肺支气管粘膜下腺体的阳性率经统计学分析结果χ2=0.0056，P＞0.9，差异无显著性。

　　三、讨论

　　双糖残基位于末端连接唾液酸的糖链上，当细胞膜上糖基转移酶异常或缺如时暴露，可被半乳糖氧化酶氧化，而与Schiff试剂反应生成红色产物而得以显示。Abulkalam等［1］和Xu等［2］等证明其表达于结直肠癌及癌前病变的粘液中。近年李昕等［3］在肺癌患者的痰液中也检测到双糖残基的表达，建议为人群肺癌普查方法。我们用此方法对肺癌组织进行检测，发现它表达于肺癌的腺癌组织（阳性率36.11%）和不同组织类型的肺癌支气管断端的粘膜下腺体（阳性率71.76%），而非腺癌的瘤组织和粘膜上皮未见表达。但我们在非肺癌的病变肺支气管断端及病灶中同样发现有表达（阳性率71.26%），因而我们认为双糖残基作为肺癌的鉴定指标应持谨慎态度。

　　参考文献：

　　［1］Abulkalam m, Shamsuddin MD ,Alaaeldeen M, et al. A Test for Detection of colorectal cancer. Hum Pathol, 1989,19:7-10.

　　［2］Xu H, Sakamoto K, Shamsuddin AM，et al. Detection of the tumor marker D-galactose-β-(1→3)-N-Acetyl-D-galactosamine in colonic cancer and precancer. Arch pathol Lab Med, 1992,116:1234-1238.

　　［3］李昕，戴晓淳，何安光，等.痰液T抗原检测——一种肺癌筛选的简易方法.中华结核与呼吸杂志,1995,18：285-286.