二英和多氯联苯对小鼠脾淋巴细胞转化影响的比较

　　多氯代二苯并二英(PCDD)和多氯联苯(PCB)广义上都属于多氯联苯类化合物。由于其在生物体代谢缓慢，被公认为重要的环境污染物。采用以PCDD中毒性最强的2，3，7，8-四氯代二苯并-P-二英(TCDD)和以多氯联苯为主的PCB为受试物，测定其对小鼠脾淋巴细胞转化的影响，以便比较两种不同结构多氯联苯类化合物的毒作用差异。

　　材料与方法

　　1.试剂：TCDD由解放军防化研究院合成的高纯度针状晶体，定量后溶于玉米油中，在85～92℃水浴中加热约3小时至完全溶解。PCB为日本产品(KC600)，溶于玉米油中。噻唑蓝四唑溴化物(MTT)为Fluka产品。刀豆蛋白A(ConA)为Sigma产品。

　　2.动物：昆明种雌、雄小鼠，体重18～22g，中国医学科学院实验动物研究所提供。合格证号为〈京动字〉第9209M13号。

　　3.脾淋巴细胞转化实验：采用MTT显色法，测定结果以吸光度(A值)和转化指数表示。转化指数=[(加ConA孔的A值-未加ConA孔的A值)/加ConA孔的A值］×100。

　　4.反应高峰时间实验：以TCDD剂量为0.464mg/kg(约1/4LD50)1次灌胃后，分别于1，3，6，10天，雌雄各解剖2只小鼠制备脾细胞，同时以雌雄小鼠各2只作对照测定A值。

　　5、剂量-反应关系实验：每组雌雄各3只。1次灌胃染毒，TCDD剂量为0.004，0.02，0.10mg/kg，PCB剂量为4，20，100，464mg/kg，同时设玉米油对照组。根据反应高锋时间及实验方便，选定解剖、制备脾细胞时间，测各剂量组及对照组的转化指数。

　　结　　果

　　1.反应高锋出现的时间：1次灌胃TCDD 0.464mg/kg后，在第3天时，染毒组与对照组A值差异无显著性，在第6天和第10天时，染毒组均明显低于对照组，说明反应高峰时间在第6天以后。为实验方便，以后测定选在染毒后第6天，TCDD和PCB染毒均同。

　　2.不同剂量染毒后的转化指数：TCDD和PCB不同剂量染毒后，测定淋巴细胞转化指数。结果表明，无论对照组还是两种化合物染毒组，转化指数均表现为雌性高于雄性。TCDD染毒组，转化指数随剂量增加而下降。经相关分析发现，转化指数与染毒剂量分别呈显著负相关(雌性r=-0.899，P＜0.01；雄性r=-0.869，P＜0.01；雌雄合并r=-0.897，P＜0.01)。TCDD 0.1mg/kg染毒组雄性及雌雄合并其转化指数显著低于对照组(P＜0.05)。然而PCB染毒各剂量组与对照组比较差异均无显著性。

　　两种受试物虽然都属多氯代芳烃类化合物，都可引起氯痤疮、肝肿大、胸腺和脾脏萎缩等毒性反应，但TCDD是三环氯苯氧基结构，PCB是二苯环直接相连的二环结构，由于结构上的差异，二者的毒性强度相差在1000倍以上。本实验结果表明，TCDD剂量在0.1mg/kg时，使小鼠脾淋巴细胞转化指数明显降低，表明对有丝分裂原的刺激反应下降，显然已出现细胞免疫功能降低。然而，PCB剂量高达464mg/kg时也未见对转化指数的影响，可是二者剂量相差4640倍。由此可见，二者毒性强度的差异可以表现为对免疫功能的影响。