微卫星DNA DXS1113的多态性与心境障碍

　　摘　要：目的　搜寻中国汉族人X染色体上的心境障碍( MD）易患性基因，探讨DNA DXS1113 多态性与MD的关系及遗传学特征。方法　运用扩增片段长度多态性（Amp-FLP)检测技术，分析80例MD患者DXS1113 二核苷酸串联重复序的多态性分布，并以80名正常人作为对照。结果　在对照组和MD组中检出12种DXS1113多态性片段，MD组与对照组之间有4种片段（158 bp、168 bp、170 bp、174 bp）的差异有显著性（P＜0.05）。结论　DXS1113与MD关联，提示中国汉族人X染色体长臂（Xq27.3-q28) 可能存在MD易患性基因。

Polymorphisms of microsatellate DNA DXS1113 and mood disorders

WU Huaian　ZHANG Yifan　SHEN Qijie

　　（Department of Biological Psychiatry, Shenzhen Institute of Mental Health, Shenzhen 518020, China）

　　Abstract：Objective　Search for a gene predisposing to mood disorders （MD）on chromosome X in the Han nationality of Chinese, to explore the relationship between DXS1113 polymorphism with MD and feature of the genetics.Methods　The dinucleotide repeat polymorphism distribution of DXS1113 for 80 patients with MD was examined by amplified fragment length polymorphism (Amp-FLP) examination technique. The control group consisted of 80 unrelated normal Chinese individuals.Results　There was 12 alleles of DXS1113 among the patient and the normal controls. The results of statistical handing showed that four alleles (158 bp， 168 bp， 170 bp， 174 bp) was significant different (P＜0.05) between patient and normal scontrols.Conclusion　The results of this study demonstrate that the DXS1113 is association with affective disorder in the Hna nationality of Chinese. This results suggest that there was a mood disorders liability gene on X chromosome (Xq27.3-q28) in Chinese samples.

　　Key words：DNA,satellite;　Polymorphism, amplified fragment length;　Affective disorders,psychotic▲

　　情感性精神障碍是常见的精神疾病，亦称心境障碍（mood disorders， MD）。家系调查双生子及寄养子研究资料均提示，MD有较强的遗传倾向［1］。 近年来我国7地区调查资料显示，MD时点患病率为0.52‰。终生患病率为0.83‰［2］。由于MD病因未明，其病因学和遗传学一直是研究者观注热点。深入研究MD的发病原因，探测MD遗传机制仍是当今精神医学和医学遗传学的重大课题。为此，我们用扩增片段长度多态性（Amplified fragment length polymorphism, Amp-FLP）技术对DNA DXS1113 多态性与MD进行关联分析，现将结果报道于下。

　　材料和方法

　　一、样本

　　1. MD组: MD患者80例，来自深圳市康宁医院、湖北医科大学附属第一医院精神科及上海市精神卫生中心1997年2月至1998年7月的住院患者，均经2名主治医师（或副主任医师）按美国精神疾病诊断统计手册第3版修订本MD诊断标准确诊。80例中男36例，女44例，平均年龄（30±11）岁。

　　2.对照组：80名健康人，均为深圳康宁医院及深圳市精神卫生研究所职工，均无血缘关系、本人及家庭无精神病史。80名中男43名，女37名，平均年龄（33±9）岁。

　　二、方法

　　1. DNA 抽提:确诊的MD组及对照组成员每人抽取静脉血5 ml，肝素抗凝，按常规方法提取白细胞基因组DNA，将抽提的DNA分组并分别编号，置于1.5 ml无菌小离心管中的无水乙醇中，保存于冰箱内（20℃）备用。

　　2.引物：聚合酶链反应（PCR）引物由中国科学院上海植物生理所植物分子国家重点试验室合成，序列为： (1) TC-AC-5′ACCTGTGGAGGATAG-TAGTCGACT-3′；(2) AG-TG-5′GGGAGCTTTAGAGAT-TTTGGTAAA-3′。

　　3. 放射性核素α-32P-dCTP：购于北京福瑞公司（批号980801）。

　　4. PCR反应体系：反应体系为10 ml，内含10 mmol/L Tris HCl（pH 8.3），1.5 mmol/L MgCl2，0.2 mmol/L dATP、dTTP、dGTP，2 μmol/L dCTP，0.1 μl α-32　P-dCTP（11 100 MBq/mmol），每种引物各3 pmol，50 ng DNA和1 U Tag酶。

　　5. PCR反应：PCR循环在Perkin-Elmer 9600型DNA扩增仪上进行，每份试验标本先将反应体系置95℃变性2 min，72℃延伸7 min，置4℃保存。热循环参数是93℃30 s，59℃30 s，63℃45 s，共28个循环。循环完毕后，置63℃7 min，然后置4℃存放。

　　6. 电泳及放射自显影：配制7 mol/L尿素的6%变性聚丙稀酰胺胶，将10 μl PCR产物与20 μl上样液（95%甲酰胺, 0.025%二甲苯青，0.025%溴酚蓝和10 mmol/LEDTA）混合取3 μl点样，在42 cm×33 cm×0.04 mm的96孔点样胶上作垂直电泳，并以M13 mp18的DNA序列lMDder作为DNA分子大小的标准，电泳后立即揭胶，烘烤至干。

　　7.放射自显影：将烤干的胶装入合适的X线片暗盒，暗室内压片，放射自显影。

　　结果

　　一、 DXS1113 等位基因类型

　　对DXS1113多态性分析结果表明，在MD组和对照组中只检出12种等位基因，其分子量大小及基因频率分别