胃癌前病变不同转归中p53、bcl-2基因的表达以及细胞增殖活性的研究

　　【摘要】　目的　探讨p53、bcl-2基因和增殖细胞核抗原(PCNA)等生物学 指标在胃癌前病变不同转归中的作用。 　方法　　采用免疫组化(LSAB)法 检测52例胃癌患者胃癌及癌前病变组织标本及56例非胃癌患者癌前病变〔胃黏膜中度以上肠 上皮化生和(或)异型增生〕组织标本的p53、bcl-2和PCNA的表达。　结果　(1)在癌前病变中，p53、bcl-2在癌组与非癌组之间的表达差异无 显著性(P＞0.05)，PCNA标记指数(PCNA　LI)在癌组表达明显高于非癌组，差异有显著 性(P ＜0.01)；(2)p53、bcl-2和PCNA表达在胃癌组织均显著高于癌变前组织(P＜0.01)； (3)在肠型胃癌 ，癌前p53、bcl-2阳性者到癌时仍全为阳性，无1例转阴；在弥漫型胃癌，癌前bcl-2 阳性者到癌时有1例转阴。　结论　在肠型胃癌发生发展过程中，p53、bcl-2蛋白表达起重要 作用，且发生癌变前细胞增殖活性已明显升高。

Expressions of p53, bcl-2 and proliferating cell nuclear antigen (PCNA) on diff erent transformation in precancerous lesions of the stomach

WU Yinqiao　WANG Men gwei　YOU Weidi, et al.

　　（Department of Gastroenterology, South Building, PLAGene ral Hospital, Beijing 100853,China）

　　【Abstract】　Objective　To study the role of biological marks (p53, bcl-2 and PCN A) on different transformation in precancerous lesions of the stomach. 　Methods　Immunohistochemical method (LSAB) was used to assess the expressions of p53, bcl-2 and PCNA in specimens from patients with (cancerous group, n=52) and wi tho ut (non cancerous group, n=56) gastric cancer. 　Results　 (1) In precancerous lesions, t here was no significant difference in p53 and bcl-2 expressions in cancerous gr o up and non-cancerous group (P＞0.05), PCNA expression in precancerous group was higher than that in non-cancerous group (P＜0.01). (2) p53, bcl-2 and PCNA expres sions in cancerous tissue were higher than those in precancerous group and non- cancerous group (P＜0.01). (3) In patients with intestinal-type carcinoma, p53 and bcl-2 remained expressed in precancerous tissue after developed into cancer, n o one was excluded. In diffuse-type carcinoma, bcl-2 expression changed into ne gative from positive in one patient. 　Conclusions　 The expression of p53 and bcl-2 significantly influenced the development of intestinal-type gastric carcinoma, a nd the proliferating activity had significantly increased before the occurence o f gastric cancinoma.

　　【Key words】　Stomach neoplasms; Precancerous conditions; Gene,P53; Gene,bcl-2; Prolifera ting cell nuclear antigen

　　在胃癌的发生过程中，胃黏膜的肠上皮化生和异型增生是重要的癌前病变，但并非所有的肠上皮化生和异型增生均演变为癌。研究显示，肿瘤是一种基因异常变化的疾病，癌变过程的每一阶段都存在癌基因和抑癌基因的一系列变化〔1〕。为此，我们检测p53、bcl-2基因以及增殖细胞核抗原(PCNA)在发生和不发生癌变的肠上皮化生及异型增生标本中的表达，以探讨各指标在胃癌前病变不同转归中的作用。

　　资料与方法

　　一、材料

　　1.胃癌组标本:1984年1月至1996年6月间，经胃镜黏膜活检和(或)手术切除胃标本病理检查诊断为癌、资料完整的病例共52例，均为男性，年龄62～82岁，平均70.1岁。Lauren分型:肠型胃癌40例，弥漫型胃癌12例。将该组根据不同阶段再分为两个部分：(1)胃癌标本：即经胃镜黏膜活检或手术切除病理诊断为胃癌的标本；(2)癌前病变标本：在诊断胃癌之前，与癌发生部位相同的黏膜活检病理诊断为中度以上肠上皮化生（18例）或异型增生（34例）的标本。癌前病变时年龄为60～79岁(平均67.3岁)，随访时间为1年～11年5个月(平均为3年8个月)。

　　2.非癌组标本:所有标本均取自与胃癌组同期检查的患者，其间诊断为中度或中度以上肠上皮化生和(或)异型增生的病例共489例，进一步筛选出第一次诊断之后有连续随访结果、且随访时间在1年以上而未发生癌变、与胃癌组年龄相当的病例共56例作为非癌组，其中肠上皮化生36例，异型增生20例，均为男性，年龄为60～82岁(平均67.0岁)，随访时间为1年10个月至11年11个月(平均6年10个月)，明显长于胃癌组。

　　二、方法

　　p53、bcl-2蛋白表达及PCNA均采用免疫组化LSAB法检测。抗p53单克隆抗体(DO-1)和抗bcl-2单克隆抗体购于北京中山生物技术有限公司，PCNA单克隆抗体和LSAB试剂盒为DAKO公司(日本)产品。实验步骤按试剂盒说明书进行。阳性对照为已知阳性组织切片在同一条件下反应，阴性对照以正常兔血清代替第一抗体。

　　三、结果判断：

　　p53、bcl-2结果按如下方法进行评分:(1)阳性着色程度:无着色为0，浅着色为1，深着色为2；(2)阳性着色范围:无着色为0，着色小于1/3为1，着色大于1/3为2，弥漫性着色为3。然后将以上两项相加为最后结果:大于或等于3为阳性病例。　　PCNA计数用PCNA标记指数(PCNA LI):　LI=PCNA阳性细胞数/计数细胞总数×100%。

　　四、统计学处理

　　所得数据采用χ2检验、t检验。

　　结　果

　　一、胃癌癌变前后p53、bcl-2表达的比较

　　见表1，2。在肠型胃癌中，癌前p53、bcl-2阳性者到癌变时一直均为阳性，无1例转阴。在弥漫型胃癌，由癌前发展到癌时bcl-2有1例转为阴性。p53阳性着色位于细胞核，呈棕黄色颗粒状(图1)；bcl-2阳性着色位于细胞浆，呈棕黄色(图2)。各切片显色分布不均，以片状和局灶性为主，少数为弥漫性分布。

表1　52例胃癌癌变前后的p53表达的自身对照(例数)

癌前病变 例数 肠型胃癌 弥漫型胃癌
+ - + -
+ 18 16 0 2 0
- 34 11 13 1 9
合计 52 27 13 3 9

表2　52例胃癌癌变前后的bcl-2表达的自身对照(例数)

癌前病变 例数 肠型胃癌 弥漫型胃癌
+ - + -
+ 23 20 0 2 1
- 29 9 11 3 6
合计 52 29 11 5 7