褪黑素对D-半乳糖亚急性中毒小鼠作用的实验研究

www.cnkang.com 2007-3-23 10:19:00 中华康网

　　褪黑素(melatonin,MT)是松果体分泌的一种主要激素，研究发现MT既可直接清除自由基，又可激活一些抗氧化酶〔1〕。D-半乳糖亚急性中毒动物是国内近年常用的一种衰老模型，受到自由基理论的支持并趋成熟。我们于1997年2月至1998年5月间进行本实验，旨在证实MT的抗氧化作用，以及MT对D-半乳糖亚急性中毒模型的形成是否有对抗作用。

　　一、材料与方法

　　1.动物及处理：昆明种雌性小鼠40只，体重26～29 g，随机分成5组。正常对照组不作任何处理；D-半乳糖模型组、模型对照组、MT 1组及MT 2组用D-半乳糖造模〔2〕，剂量为100 mg·kg-1(皮下注射)，共6周。模型对照组腹腔内注射MT溶媒(含10％乙醇的生理盐水5 ml·kg-1.d-1)；MT1组每天腹腔内注射MT 10 μg·kg-1；MT 2组每天腹腔内注射MT 5 mg·kg-1。最后一天，于MT给予后2 h处死动物，解剖小鼠并观察主要内脏器官的变化，测定胸腺指数，取脑、心、肝组织，-70°C冻存备用。

　　2.指标测定：胸腺指数以胸腺(mg)/10 g体重表示。肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及肝、脑组织谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)活性测定按试剂盒(南京建成生物工程公司生产)说明书进行操作。肝、脑组织丙二醛(MDA)含量的测定采用TBA荧光比色法。心肌脂褐质(LPF)含量测定采用Sohal法。

　　二、结果

　　见表1。D-半乳糖诱导了昆明种小鼠亚急性中毒，小鼠体内脂质过氧化增强及抗氧化能力降低。MT(5 mg)对模型各项指标的拮抗作用明显；而MT(10 μg)除对模型小鼠肝及脑组织GSH-Px有激活作用外，对其他指标影响不明显。MT对SOD无激活作用。

表1　褪黑素对D-半乳糖亚急性中毒小鼠胸腺指数、抗氧化酶、

　　脂质过氧化产物的影响(±s)

组别鼠数

　　(只)
胸腺指数

　　(mg/10g体重)
SOD

　　(NU/ml)
MDA(nmol/mg体重) LPF

　　(μg/g体重)
GSH-Px(U/mg蛋白)
肝脑肝脑
正常对照组 8 22.0±4.9 53.8±6.2 0.44±0.08 0.74± 0.08 1.95±0.29 　104±7 　132±10
模型对照组 8 15.5±3.7 45.8±4.4 0.63±0.06 1.12±0.10 3.59±0.42 84±14 85±13
D-半乳糖模型组 8 14.3±2.4＃＃ 42.5±4.2＃ 0.63±0 .04＃＃ 1.10±0.08＃＃ 3.61±0.51＃＃ 89±15＃ 85 ±13
MT1组 8 14.8±2.5 44.7±4.8 0.59±0.06 1.12±0.08 3.4 6±0.65 129±7** 125±10**
MT2组 8 19.7±4.0** 42.5±5.1 0.50±0.07** 0.87±0.05** 2.27±0.49 134±9** 160±11**

　　注：t检验，与正常对照组比较，＃P＜0.05，＃＃P＜0.01；与模型对照组比较，P＜0.01

　　三、讨论

　　长期过量摄入D-半乳糖可使小鼠体内代谢紊乱，发生非酶糖基化反应及产生自由基。本实验中两种剂量MT均激活GSH-Px活性，MT 2组小鼠体内脂质过氧化程度明显减轻，MT1组不明显。提示MT(5 mg)直接清除自由基及激活GSH-Px作用明显，而生理剂量的MT，可能由于在体内的半衰期较短，使其维持GSH-Px高活性时间短，直接清除自由基的作用不明显。胸腺萎缩主要源于胸腺细胞的凋亡，自由基及一些应激激素都能引起细胞凋亡。MT通过抑制肾上腺糖皮质激素的产生及抗氧化阻止了胸腺的萎缩。临床使用大剂量MT的副作用未见报道，但有报道动物实验偶发肿瘤及由于MT不纯、其合成前体引起嗜酸细胞-肌痛综合征者〔3〕。本实验中小鼠主要内脏器官未见异常。MT更广泛的抗氧化特性及其在生物体内更明确的作用机制及临床应用有待进一步研究。

　　参考文献

　　1，Reiter RJ,Tang L,Garcia JJ,et al. Pharmacological actions of melatonin in oxygen radical pathophysiology. Life Sci,1997,60 :2255-2271.

　　2，龚国清, 徐黻本.小鼠衰老模型的研究.中国药科大学学报, 1991, 22:101 -103.

　　3，Huether G.Melatonin as an antiaging drug: between facts and fantasy.Gerontology,1996,42:87-96.