类风湿性关节炎患者血清抗Sa抗体检测及临床意义

　　基金项目:吉林省卫生厅科学基金资助项目（编号:96037）

　　【摘要】 目的 检测类风湿性关节炎（RA）患者血清抗Sa抗体，并证明抗Sa抗体对RA的诊断意义。方法 采用Western-blot方法。结果 抗Sa抗体诊断RA的敏感度为42.7%，特异度为100%，阳性确诊率为100%，阴性确诊率为71.1%。结论 血清抗Sa抗体对RA诊断的特异度和阳性确诊率均高于类风湿因子（RF），因此具有临床实用价值。

　　关键词 类风湿性关节炎抗Sa抗体 Western-blot方法 类风湿因子

　　Detection and clinical significances of anti-Sa antibody in RA serum

　　Wang Chang，Wang Jiandong，Zeng Changqian

　　Central Hospital of Jilin City，Jilin132011.

　　【Abstract】 Objective To detect anti-Sa antibody in rheumatoid arthritis（RA）serum and prove the signifiˉcances of seral anti-Sa antibody in diagnostic RA.Methods Western-blot method was used.Results The sensiˉtivity，specificity，PPV and NPVwere42.7%，100%，100%and71.1%respectively.Conclusion Diagnostic speciˉficity and PPV of seral anti-Sa antibody to RA patients were better than those of rheumatoid factor（RF）and it was practical clinically.

　　Key words RA anti-Sa antibody western-blot method RF

　　类风湿性关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是最常见的自身免疫病，发病率1%～2% ［1～3］ 。RA患者血清中可以检测到多种自身抗体，如RF、AKA、APF、RA33抗体、HaT-1抗体等，这些抗体在RA患者血清的阳性率为5%～75%，但均缺乏特异性 ［4～9］ 。抗Sa抗体是新近发现的RA患者自身抗体 ［10］ 。我们从人胎盘中提取Sa抗原，建立了血清抗Sa抗体的Western-blot检测方法，并研究了血清抗Sa抗体对RA患者的诊断意义。现报告如下。

　　1 材料与方法

　　1.1 材料 胎盘取自北京协和医院妇产科，产妇身体均健康，无自身免疫病和传染病。RA、MCTD、SLE、SS和PSS患者血清由北京协和医院和北京友谊医院提供，符合RA诊断标准。健康人血清由吉林市中心血站提供。酶标抗体购自华美生物工程公司。低分子量蛋白（marker）购自上海生化试剂公司。DE52和DAB购自Sigma化学公司。NC膜购自浙江黄岩四青生化材料厂。考马斯亮蓝、bis和tris等试剂均为分析纯。

　　1.2 仪器 HD25-A核酸-蛋白监测仪由宁波市医用仪器厂生产。DYY-Ⅲ电泳槽和DYY-Ⅲ电泳仪由北京六一仪器厂生产。DYY-Ⅲ垂直板电泳仪由北京东方仪器厂生产。隔水式电热培养箱由上海跃进医疗仪器厂生产。200/2.0转印电泳仪为Bio-Rad生产。超速冷冻离心机J2-21为Beckman公司生产。

　　1.3 Western-blot方法检测血清抗Sa抗体 ［11］ 取脾制成匀浆，4℃15000r/min离心45min，收集上清。过DE52柱，洗脱，分别收集各组洗脱液。透析浓缩。SDS-PAGE分离。浓缩胶层电压100V，分离胶层电压150V。电泳完毕后，一部分胶用考马斯亮蓝染色，脱色液脱色，照相。另一部分胶经常规电转印转NC膜，4℃下截面电流120mA，12h。转印后，NC膜用15%小牛血清中37℃封闭2h。洗涤5次。然后与1:40稀释的待检血清37℃孵育2h，洗涤5次。再与1:800稀释的酶标抗体37℃孵育2h，洗5次。在DAB底物液中显色15min，蒸馏水漂洗。

　　1.4 重复性试验 取三份抗Sa抗体阳性的RA血清同日内分别重复6次检测其抗Sa抗体的滴度。取3份抗Sa抗体阳性的RA血清，分别在不同实验日检测其抗Sa抗体的滴度。分别计算批内和批间变异系数。

　　2 结果

　　2.1 血清抗Sa抗体检测结果 抗Sa抗体阳性者，NC膜上50kD有特异带显色。75例RA患者抗血清Sa抗体阳性32例，阳性率为42.7%。5例MCTD、35例SLE、15例SS、4例PSS患者和47例正常对照血清抗Sa抗体均阴性。抗Sa抗体阳性率在各组差异有显著性（P<0.05）。因此抗Sa抗体特异存在于RA患者血清中。

　　2.2 抗Sa抗体的滴度与病程关系 将RA患者按患病时间分组，各组抗Sa抗体滴度见表1。表1 抗Sa抗体滴度与病程的关系 结果经χ 2 检验和相关系数分析，抗体滴度与患者病程的相关系数为-0.660，P<0.05，表明两者密切相关。

　　2.3 抗Sa抗体阳性率与患者年龄、性别的关系 抗Sa抗体阳性率在各年龄组的分布见表2。不同年龄组患者血清抗Sa抗体阳性率见表2。表2 抗Sa抗体阳性率与患者年龄、性别的关系上述结果经统计分析表明，抗Sa抗体的阳性率在各年龄组间差异无显著性（P>0.05）。75例RA患者中男性12例，抗Sa抗体阳性4例，女性63例，阳性有28例。抗Sa抗体阳性率在男性和女性患者组间差异无显著性（P>0.05）。

　　2.4 血清RF和抗Sa抗体诊断RA的比较 结果见表3。表3 抗Sa抗体与RF的关系结果经统计学处理，两个指标相互关系比较，α=0.05，P>0.05，两个指标检测结果没有关联性，表明抗Sa抗体不依赖RF。根据公式计算得到抗Sa抗体诊断RA的敏感度为42.7%，特异度为100%，阳性确诊率为100%，阴性确诊率为71.1%。RF对RA诊断的敏感度为72.0%，特异度为79.2%，阳性确诊率为71.2%，阴性确诊率为80.0%。

　　3 讨论

　　RA是常见的自身免疫病，其临床表现复杂。55%～70%的隐袭型和20%～30%的间歇型RA患者初发症状不典型，因此早期确诊困难，患者常失去最佳治疗机会 ［1～3］ 。RA患者血清可以检测到多种自身抗体 ［4～9］ ，其阳性率5%～75%不等，但假阳性率均大于5%。最近文献报道RA患者血清特异存在抗Sa抗体 ［10］ 。Sa抗原可从30%尸体脾和100%人胎盘中提取，新鲜脾或胎盘Sa抗原含量比-70℃冷藏后的高 ［12］ 。我们从人胎盘 提取Sa抗原，与国外报道的用脾提取物作抗原相比，其来源更方便、经济。人胎盘组织提取液经DE52离子层析分离的不同洗脱组份，经SDS-PAGE分析，证实50kD的Sa抗原存在于0.20mol/L和0.25mol/L NaCl TBS洗脱组份中。而前一组Sa抗原含量比后组高，而且相近分子量杂蛋白少。我们用Western-blot方法检测了患者和对照血清的抗Sa抗体，其敏感度为42.7%，特异度为100%，阳性确诊率为100%，阴性确诊率为71.1%，因此辅助诊断RA的价值优于RF。抗Sa抗体与患者的年龄、性别无关，与病程相关，这些均与国外文献报道一致 ［10，12］ 。抗Sa抗体与疾病活动性正相关，治疗缓解后，抗体滴度下降 ［12］ ，因此血清抗Sa抗体检测可以为疾病活动性和疗效评价提供依据。

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