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链球菌蛋白G在固相放射免疫分析中的应用

www.cnkang.com  2007-3-21 9:54:00  中华康网

  链球菌蛋白G(SPG)分子中,含有多个IgG Fc段结合区,两者结合不影响IgG Fab段对抗原的结合;据此,用SPG制备固相抗体应用于放射免疫分析。

  基因重组SPG,用50mmol/L、pH9.6碳酸盐缓冲液溶解,浓度为0.1μg/ml。包被聚苯乙烯试管:1ml/管,室温8?h,弃液,加洗涤液PBST(10mmol/L、pH7.4 PBS, 含0.05% Tween20)1ml,洗3遍。每管加稀释后甲状腺素抗体1ml,含0.1%明胶,室温过夜,PBST洗3遍,固相抗体管自然干燥,4℃封存。游离甲状腺素放射免疫分析:取固相抗体管若干,分别加入甲状腺素系列标准品或血清样品,125I-甲状腺素衍生物,PBS补足体积1ml。室温8?h,γ-计数仪测总放射性后,弃液,PBST洗1遍,测各管放射性计数,作出标准曲线并给出样品结果。

  结果:以固相抗体最大放射性标记物结合率为指标,平均批内变异系数为3.2%,批间8.7%;洗涤数次,平均每次结合率下降<0.5%;固相抗体管4℃保存6个月,结合率保持不变;对56份样品血清检测,与液相法商品试剂盒对照,相关系数的检验r=0.987,P<0.001;配对比较t检验:t=0.562, P>0.5。

  SPG用于固相抗体的制备简单易行,抗体稳定、均一;应用于放射免疫分析,获得了与液相法相同的结果,因此SPG是一种良好的固相抗体制备介质。

 

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