我国不同人群输血传播病毒感染调查

　　【摘要】　目的　了解不同人群输血传播病毒(TTV)的感染状况。方法　采用套式PCR法检测血清标本中TTV DNA，并对其中1株TTV的部分基因序列进行了测定。结果　不同人群TTV DNA阳性率分别为：正常体检人群10.3%，献血员43.7%，吸毒者15.6%，血液透析病人54.4%，妓女65.0%，慢性丙型肝炎病人25.0%，非甲～庚型肝炎0/11。结论　TTV在各类人群中均有较高的感染率。

Detection of transfusion transmitted virus (TTV) in different populations of China

LING Binhua,ZHUANG Hui,LI Kui,et al.

Department of Microbiology, Beijing Medical University,Beijing 100083

　　【Abstract】　Objective　To investigate the prevalence of transfusion transmitted virus (TTV) in different populations of China. Methods　TTV DNA was detected in sera collected from different populations by nested PCR. Partial gene of a TTV isolate was directly sequenced. Results　The prevalences of TTV in various populations were as follows: 10.3% (31/301) in general population when receiving physical checkup; 43.7% (14/32) in blood donors; 15.6% (5/32) in intravenous drug addicts; 54.4% (6/11) in hemodialysis patients; 65% (13/32) in prostitutes; 25% (4/16) in patients with chronic hepatitis C. None of the 11 patients with non A-G hepatitis was detected TTV DNA. Conclusion　High prevalence of TTV infection was found in different populations of China.

　　【Key words】　Transfusion transmitted virus (TTV)　　Polymerase chain reaction (PCR)　　Non A-E hepatitis virus

　　椐国内外报道，在急性散发性病毒性肝炎中约10%～20%为非甲～戊型肝炎，其中能检测到庚型肝炎病毒(HGV)者仅占2%～20%［1，2］，且HGV的致病性尚有争议，提示存在新型肝炎病毒的可能性。1997年底，日本学者［3］应用代表性差异分析法(Representative Differentiation Analysis.RDA)从1名输血后非甲～戊型肝炎病人中分离到1种新病毒，称为输血传播病毒(TTV)。据报道［4］，该病毒感染与血清丙氨酸转氨酶(ALT)异常有关，且在各型肝炎病人中均有较高的感染率。为了解我国人群TTV感染状况，我们应用套式聚合酶链反应法(nPCR)，对不同地区不同人群进行了TTV DNA检测，并对其中1株TTV DNA部分基因序列进行了测定。现将结果报告如下。

　　对象与方法

　　一、研究对象：献血员、血液透析患者、吸毒者、妓女的血清标本采自深圳、安徽、云南、青岛；常规体检人群、慢性丙型肝炎病人以及非甲～庚型肝炎患者血清标本采自北京。所有血清标本均直接送到北京医科大学微生物学系，置－20℃下保存备检。

　　二、检测方法：酶联免疫法(EIA)检测甲～庚型肝炎病毒的血清学指标；套式逆转录聚合酶链反应法(RT-nPCR)检测HGV RNA。TTV DNA 检测参照日本报道的TTV序列引物，采用套式PCR法(nPCR)，外引物为P1：5′-gcagcagcatatggatatgt-3′，P2：5′-tgactgtgctaaagcctcta-3′；内引物为P3：5′-catacacatgaatgccaggc-3′，P4：5′-gtacttcttgctggt

　　gaaat-3′。TTV DNA提取采用SDS-蛋白酶K裂解法。第一轮和第二轮的PCR循环参数为94℃，30秒；55℃，30秒；72℃，50秒，终末延伸5分钟，两轮均为30个循环。扩增产物经溴化乙锭染色，2%琼脂糖凝胶电泳，然后在紫外灯下观察鉴定。每次PCR均设阴性、阳性和空白对照。

　　三、PCR产物序列测定：扩增产物经0.7%低熔点琼脂糖凝胶电泳分离，切下目的DNA条带，用原平公司纯化试剂盒进行回收纯化，采用双脱氧链末端终止法直接测序，测序试剂盒购自Promega公司，测序仪为Bio-Rad公司产品。

　　结　果

　　一、不同人群TTV DNA的检出情况：由表1可见，TTV DNA阳性率以妓女最高，以下依次为血液透析病人、献血员、慢性丙型肝炎病人、静脉吸毒者和常规体检人群，11名非甲～庚型肝炎病人中未检出TTV DNA。

　　TTV与乙型(HBV)、丙型(HCV)、戊型(HEV)和庚型肝炎病毒(HGV)合并感染情况见表2。TTV与HCV合并感染最为常见，其次是与HBV，与HEV和HGV合并感染较为少见。此外，还可见与HBV和HCV、与HCV和HGV，以及与HCV、HEV和HGV重叠感染者。单独TTV DNA感染仅占37.8%。

表1　不同人群TTV DNA检出情况

检测人群 检测人数 TTV DNA阳性例数(%)
常规体检人群 301 31(10.3)
献血员 32 14(43.8)
静脉吸毒者 32 5(15.6)
血液透析病人 11 6(54.5)
妓　女 20 13(65.0)
慢性丙型肝炎病人 16 4(25.0)
非甲～庚型肝炎病人 11 0(0.0)

表2　TTV与HBV、HCV、HEV和HGV合并感染情况

合并感染组别 例数 构成比(%)
TTV＋HBV＋ 5 　　11.1
TTV＋HCV＋ 15 33.3
TTV＋HEV＋ 1 2.2
TTV＋HGV＋ 1 2.2
TTV＋HBV＋HCV＋ 3 6.7
TTV＋HCV＋HGV＋ 1 2.2
TTV＋HCV＋HEV＋HGV＋ 2 4.5
单独TTV＋ 17 37.8
合　　计 45 100.0

　　二、1株TTV部分基因序列测定：为确定nPCR检测TTV DNA结果的可靠性，我们对1株TTV DNA阳性的nPCR产物直接进行了序列测定，并与日本报道的TTV DNA序列(AB008394)进行了比较(图1)，其同源性为98.7%。

A t t t a c a g a c c c a c a a c t a c t a g t a c a c a c a g a c c c c a c a a a a g　
B -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -　
A g c t t t g t t c c t t a c t c t t t a a a c t t t g g a a a t g g t a a a a t g c c　
B -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -g -　
A a g g a g g t a g t a g t a a t g t g c c t a t t a g a a t g a g a g c t a a a t g g　
B -- -- -- -- -c -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -　
A t a t c c a a c a t t a t t t c a c c a g c a a g a a g t　
B -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -- -　

1　从我国分离的1株TTV DNA的部分核苷酸序列(B)与日本株(A：B008394)比较

　　讨　论

　　1997年底日本学者［3］报道，从输血后非甲～庚型肝炎病人中分离到一种DNA病毒，称为TTV，该病毒在暴发性肝炎和原因不明的慢性肝病中有相当高的流行，并认为与血清ALT异常有关［4］，为探讨非甲～庚型肝炎病毒提供了新的线索。对我国不同人群TTV感染状况检测结果表明，在正常体检人群中TTV DNA阳性率为10.3%，与日本(12%)［4］和英国(10%)［5］的报告接近。在正常人群中存在如此高的携带率，其意义有待探讨。慢性丙型肝炎的TTV DNA阳性率为25%(4/16)，与英国报告一致。本研究表明，TTV可与其他型肝炎病毒合并感染，也可单独感染，但绝大多数TTV DNA阳性者的血清ALT正常。有学者报告，大多数TTV阳性病例肝脏无明显生化或组织学改变，从而认为TTV可能与HGV相似，是一种与疾病无关的人类病毒［5］。

　　本次检测的丙型肝炎病人均有献血史，TTV DNA检出率为25%，妓女中均无献血史，但TTV DNA检出率高达65%，提示TTV经血传播外，还可能存在性接触传播。非甲～庚型肝炎病人中未检测到TTV DNA，可能与样本量小有关。

　　虽然所测定的TTV DNA部分基因序列的片段较短，与日本株的同源性为98.7%，表明该区段比较保守；本研究设计的引物适用于TTV DNA的检测。

　　对TTV的研究尚处于起步阶段，关于该病毒的分子生物学、流行病学及其致病性等有待进一步研究。

　　参考文献

　　1　Linnen J,Jr Wages J,Zhang-Keck ZY,et al.Molecular cloning and disease association of hepatitis G virus: a transfusion-transmissible agent.Science,1996,271∶505-509.

　　2　Leary TP,Muerhoff SA,Simons JN,et al.Sequence and genomic organization of GBV-C:a novel member of the flaviviradae assiciated with human non A-E hepatitis.J Med Virol,1996,48∶60-67.

　　3　Nishizawa T,Okamoto H,Konishi K,et al.A novel DNA virus (TTV) associated with elevated transaminase levels in posttransfusion hepatitis of unknown etiology.Biochem Biophy Com,1997,241∶92-97.

　　4　Okamoto H,Nishizawa T,Kato N,et al.Molecular cloning and characterization of a novel DNA virus (TTV) associated with posttransfusion hepatitis of unknwon etiology.Hepatol Res,1998,10∶1-16.

　　5　Naoumov NV,Petrova EP,Thomas MG,et al.Presence of a newly described human DNA virus (TTV) in patients with liver disease.Lancet,1998,352∶195-197.