实验性变态反应性脑脊髓炎组织病理学变化及温阳补肾方对其的影响

 　　摘要：在复制了实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)豚鼠的基础上，使用HE和Luxol Fast Blue染色技术，观察了其组织病理变化及中药复方温阳补肾方对其的影响。结果发现应用温阳补肾方可减轻EAE豚鼠的病理损害；海马CA-3区的锥体细胞也参与了EAE的发病过程。为温阳补肾方治疗多发硬化从形态学方面提供了科学依据。

　　中图分类号：R322.81

Histopathological Changes in the Guinea Pigs with Experimental Allergic

　　Encephalomyelitis and the Effects of Wenyangbushen Decoction on Them

Bai Limin (白丽敏), Song Faxian (宋发贤), Li Xi (李 曦), et al.

　　(Beijing University of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100029)

　　The histopathological changes in the guinea pigs with experiment al all ergic encephalomyelitis (EAE) and the effects of Wenyangbushen Decoction (WD) on them were observed by HE and Luxol Fast Blue staining methods. The results show ed that the pyramidal cells in the hippocampal CA3 area were also related to the onset of EAE, and WD could reduce the pathological lesions in the guinea pigs w ith EAE. The results have provided some morphologic evidence for the clinical us e of WD in the treatment of multiple sclerosis.

　　KEY WORDS: Multiple Sclerosis; Wenyangbushen Decoction; Experimental Aller gic Encephalomyelitis; Guinea Pig

　　多发硬化（Multiple Sclerosis，MS）是一种常见的中枢神经系统（CNS）炎性脱髓鞘疾病 ，也是神经内科的常见疑难病之一，世界各地均有发病。本病多发于青、壮年，且病程长， 反复发作，迁延多年，最终出现瘫痪、失明等严重的中枢神经系统症状，严重地威胁人类的 健康［1］。温阳补肾方是孙塑伦教授多年临床治疗MS的经验方［1］，本 实验使用实验性变态反应性脑脊髓炎（EAE）豚鼠，研究了温阳补肾方对实验性变态 反应性脑脊髓炎的组织病理变化，为探讨中药治疗多发硬化的作用机理提供形态学依 据。

　　1　材料和方法

　　1．1　药品与试剂

　　中药煎剂：温阳补肾方按中药常规方法煎煮，制成（2 g／mL）药液。主要成分有：仙灵脾 、肉苁蓉、熟地、首乌、知母、益母草、当归、苍术、牛膝等。中药购自北京康馨达药店（ 药品来源于同仁堂北城批发部）；髓鞘碱性蛋白（MBP）：哈尔滨医科大学免疫学教研室张 凤蕴教授惠赠，浓度3．2 g／L，从新鲜牛脑提取［4］；卡介苗（BCG）：75 mg／支 ，购自中国药品生物制品检定所。

　　1．2　EAE豚鼠模型的复制

　　将髓鞘碱性蛋白（MBP）、卡介苗（BCG）、不完全福氏佐剂（IFA）按2∶1∶3（体积比）制 成抗原；使用200～250 g雄性豚鼠（预防医学科学院流行病与微生物学研究所提供），在10 ％水合氯醛（4 mL／kg）腹腔注射麻醉下，按6．6 g／kg的量给动物两后足掌皮下多点注射 MBP免疫［2］，免疫1次。

　　1．3　动物分组及处理

　　动物共分3组，每组10只。正常组：正常豚鼠，不作任何处理；模型对照组（简称对照组） ：造模后豚鼠，每天灌胃生理盐水（每只1．5 mL），直至取材；中药防治组（简称中药组 ）：造模后豚鼠于造模当天开始，每天按每公斤体重12．48 g生药的量（按体表面积折算） 给予中药温阳补肾方煎剂灌胃，直至取材。各组豚鼠相同常规饲养，每日称重并观察发病情 况。分别于免疫注射后第14、21、28天处死取材。

　　1．4　组织病理学技术

　　10％水合氯醛腹腔注射（4 mL／kg），开胸常规经心脏左心室、升主动脉灌注无菌生理盐水200 mL（快速）， 10％中性福尔马林150～200　mL灌注； 取脑和脊髓（颈膨大段及腰膨大段）福尔马林后固定48～72　h，石蜡包埋，制成石蜡切片，片厚5　μm，部分切片进行HE染色，部分切片进行Luxol Fast Blue髓鞘染色。

　　2　结果

　　2．1　EAE豚鼠的行为变化

　　MBP免疫后的豚鼠在免疫后4～5 d开始出现体重下降（见表1），　5～22 d出现一侧或两侧后肢的瘫痪无力，身体倒向一侧，伴有精神萎靡、拒食、背部脱毛、二便失禁等症状，发病高峰在24 d左右。

表1　体重变化比较（g;n=10;±s）

组　别 发病前 发病后
对照组 258.00±21．29 229．50±37．18
中药组 259.00±23．85 249．75±36．84

　　注：两组比较P＜0．012．2　病理变化

　　组织病理学观察发现，对照组与中药组豚鼠脑和脊髓内均出现：①小血管（主要是小静脉）周围炎性细胞浸润，呈特征性的单层或多层“袖套状”（或称“血管套”）改变，病灶多发性，大小不一（见图1，图2）。②脑或脊髓软膜增厚大量炎性细胞侵润（见图3）。③有些部位以胶质细胞增生为主，形成胶质小结（见图4）。④Luxol Fast Blue髓鞘染色可见白质区内髓鞘结构完全或不完全崩解、脱失（见图5）。⑤脑内出现软化灶（见图6）。③海马CA3区的锥体细胞胞质呈嗜酸性，细胞体缩小、胞浆内尼氏体消失、核固缩、核仁消失，部分细胞脱失（见图7，图8）。

图1　28 d对照组豚鼠CNS血管周围炎性细胞浸润，

　　呈“袖套”样改变HE×250

图2　28 d中药组豚鼠CNS血管周围炎性细胞浸润，

　　呈“袖套”样改变HE×250