恶性肿瘤组织中结核杆菌DNA的检测

　　摘　要　目的　探讨结核杆菌感染与恶性肿瘤的关系。方法　采用多聚酶链反应(PCR)技术检测两种恶性肿瘤组织中结核杆菌DNA(TB-DNA)。结果41例恶性肿瘤组织中检出TB-DNA阳性患者8例，占19.5%，且TB-DNA阳性患者肿瘤发病部位基本与结核病的好发部位一致。结论结核杆菌感染可能与一些恶性肿瘤 存在特殊相关性。

Detection of tuberculosis DNA in Some malignant Tumors

Song Lanying,Zhang sujuan,Yan Wensheng,et al.

　　department of Pathology,the First Military Medical University,Guangzhou 510515

　　Abstract　To study the relation of mycobacterium tuberculosis infection with malignant tumors.Polymerase chain reaction(PCR) assay was used to detect tuberculosis dNA(TB-DNA)in two kinds of malignant tumors.TB-DNA was detected in 8 of 41 malignant tumor tissues(19.5%),moreover,the incidence locations of TB-DNA positive malignant tumors were mostly similar to that of tuberculosis.There is probably a special association between mycobacterium tuberculosis infection and some malignant tumors.

　　Key words　Malignant tumors Mycobacterium tuberculosis PCR

　　据估计，全世界约有1/3的人口感染结核杆菌［1］，结核杆菌特别是其细胞壁缺陷型(L型)与肿瘤的关系引起人们注意。我们应用多聚酶链反应技术对两种恶性肿瘤进行结核杆菌DNA(TB-DNA)的检测，探讨结核感染与恶性肿瘤的关系。

　　1　材料与方法

　　1.1　材料　收集南方医院病理科1994年以来手术切除诊断明确的肠原发性恶性淋巴瘤20例及女性肺癌21例，所有标本常规石蜡切片，HE染色，光镜观察，部分病例做免疫组化标记LCA、L26、UCHL-1、Mac387等，同时回顾分析临床资料。

　　1.2　PCR检测　结核杆菌检测试剂盒购于中山医科大学达安基因诊断中心，PCR扩增仪为Hema480(珠海黑马医学仪器有限公司)。

　　1.2.1　模板制备　5μm厚石蜡切片1～2片，常规脱蜡至乙醇，自然干燥，用无菌刀片将组织刮入1.5ml eppendrof管中，加DNA提取液50～100μl，煮沸10分钟，10000rpm离心10min，取上清2μl作模板，常规PCR扩增。同时设人型结核杆菌基因组DNA作为阳性对照，以高纯水代替模板作为阴性对照。

　　1.2.2　PCR扩增　93℃变性3min，然后进行30次循环：93℃变性45s，55℃退火45s，72℃延伸1min，最后72℃延伸5min，结束循环。

　　1.2.3　电泳分析　每例取PCR产物10μl(含溴酚兰指示剂)，置于2%的琼脂糖凝胶中电泳，在紫外检测仪上观察并照相。

　　2　结　果

　　2.1　临床病理资料　20例肠原发性恶性淋巴瘤男13例，女7例，发病年龄在4～73岁；发病部位结肠8例，盲肠7例，小肠5例；B细胞淋巴瘤14例，T细胞淋巴瘤6例，50%以上经免疫组织化学证实，12例有周围淋巴结累及。21例女性肺癌患者，发病年龄在33～68岁，周围型肺癌17例，中央型肺癌4例；发生于左肺者11例，右肺10例；组织学类型腺癌10例，腺鳞癌7例，鳞癌、小细胞癌、大细胞癌、类癌各1例；支气管旁淋巴结累及者10例。

　　2.2　PCR检测结果　41例恶性肿瘤组织中检出TB-DNA阳性患者8例(8/41)，其中肠恶性淋巴4例(4/20)，女性肺癌4例(4/21)。8例TB-DNA阳性的恶性肿瘤患者年龄在4～68岁，6例有周围淋巴结累及，瘤组织中均未见典型结核病变。4例TB-DNA阳性的肠恶性淋巴瘤发病部位多近回盲部，B细胞型3例，T细胞型1例。4例TB-DNA阳性的肺癌患者发病部位在左下叶2例，右上或右中上肺者2例；中央型者2例；腺癌2例，鳞癌、类癌各1例。

　　3　讨　论

　　结核杆菌遍布于我们的周围环境，其主要经呼吸道和消化道感染人体，因此我们选择消化道和呼吸道肿瘤作为我们的研究对象，又因结核病是与免疫有关的疾病，我们选择发病与免疫有关的肠恶性淋巴瘤，为了减少吸烟因素的影响，选择了女性肺癌。本组41例恶性肿瘤经PCR技术检测出TB-DNA阳性患者8例，占19.5%，与一些报道相比阳性率较低［2,3］。

　　关于TB-DNA阳性肿瘤与结核杆菌感染的联系，一般有两种假设：①结核杆菌感染发生在癌变之后，即过路感染。②结核杆菌感染发生在癌变之前，并在瘤的形成中起一定作用。结核杆菌是一种寄生在细胞内的病原菌，可在吞噬细胞内生长繁殖，并在体内外因素或抗结核药物作用下细胞壁部分或完全缺陷形成L型，L型原生小体颗粒与一般中等大小病毒相近，很多学者注意到某些细菌L型与病毒一样可以引起肿瘤。迄今为此，已在乳腺癌、何杰金氏病、白血病等多种肿瘤组织中分离出细胞L型，且分离的细菌L型可引起类似的肿瘤［4］。结核杆菌L型主要存在于慢性结核病灶内，目前认为结核杆菌的慢性感染包括结核病的慢性化和长期慢性带菌感染。PCR对组织中的结核杆菌及其L型均有很好的诊断价值。本组8例TB-DNA阳性恶性肿瘤患者组织中均未见典型结核病变，且发病部位与肺结核及肠结核的好发部位基本一致，因此TB-DNA阳性恶性肿瘤患者是否存在结核杆菌长期带菌慢性感染是需进一步探讨的问题。

　　由于本组病例数少，尚不能排除结核杆菌过路感染。结核杆菌与恶性肿瘤之间的联系有待深入研究。

　　参考文献

　　1　Spiebery JS,Carroll MC,Brown eJ.A macrophage invasion mechanism of pathogenic mycobacteria.Science.1997;277(22):1097

　　2　Alavi HA,Moscovic EA.Immunolocalization of cell-wall-deficient forms of mycobacterium tuberculosis complex in sarcoidosis and in sinus histocytosis of lymph nodes draining carcinoma.Histol Histolpathol. 1996；11(3)：683

　　3　汪万英，姚敏，郭彬.结核杆菌L型感染与肺癌关系.中国人兽共患杂志.　1997；13(2)：79

　　4　黄谷良等主编.细菌L型与疾病.第一版，北京：学苑出版社，1991；183-184