作者：李明成，张晓英，郑华    作者单位：1.北华大学医学院微生物学教研室,吉林 132013； 2.吉林省吉林市中心医院妇产科； 3.吉林大学第一医院皮肤科

【摘要】  目的 探讨女性生殖道感染人乳头瘤病毒基因类型及与子宫颈糜烂关系，为宫颈癌防治提供依据。方法 收集454份子宫颈糜烂标本，分成尖锐湿疣（CA）组和非CA组，采用免疫组化法和PCR技术检测人乳头瘤病毒（HPV）基因类型。结果 免疫组化法检测宫颈糜烂感染HPV阳性率，CA组为67.8%，非CA组为47.7%。PCR检测宫颈糜烂Ⅰ°、Ⅱ°、Ⅲ°感染HPV阳性率，CA组Ⅰ° 55.5%，Ⅱ° 64.7%，Ⅲ° 83.3%。非CA组Ⅰ° 32.8%，Ⅱ° 49.6%，Ⅲ° 62.3%。HPV-DNA类型以6，11，16，18，58，45，33型为主。结论 本地区宫颈糜烂患者有较高的HPV感染率，并与糜烂程度呈正相关，监测和控制女性生殖道HPV感染对宫颈癌防治具有重要意义。 中国人民解放军总医院第一附属医院皮肤科张云杰
【关键词】  人乳头瘤病毒；尖锐湿疣；宫颈糜烂
基金项目： 吉林省科技发展计划项目（20050702-7）
　　Study on human papilloma virus infection association with cervical erosion among female congential tract
　　LI MingCheng，ZHANG Xiaoying,ZHENG Hua.
　　Medical College of Beihua University(Jilin 132013，China)
   
　　Abstract： Objective  To explore the genotype and distribution of humam papilloma viruses among cervical erosion patients，and to guide the preventing and treating cancer of uterine cervix.Methods  The cervical erosion specimens were collected and divided into two groups,the CA group and no-CA group.The immunohistochemistry assay and PCR technique were used to detect the genotypes of HPV-DNA.Results  The 76 cases (67.8%) in CA group and the 163 cases (47.7%) in no-CA group were confirmed to be HPV-DNA positive.The positive rates of HPV were Ⅰ° 55.5%,Ⅱ° 64.7% and Ⅲ° 83.3% in CA group;and Ⅰ° 32.8%,Ⅱ° 49.6% and Ⅲ° 62.3% in non-CA group among cervical erosion patients respectively.The genotype of HPV-DNA was 6,11,16,18,58,45 and 33.Conclusion  There is higher incidence of HPV among cervical erosion patients in the region,and the incidence of HPV has a positive association with the cervical erosion degrees.It is of paramount importance to control HPV infection and treat cervical erosion effectively for preventing and treating cancer of uterine cervix.
    Key words： human papilloma virus；condyloma
acuminatum；cervical erosion
　　近年来，越来越多的研究表明，病毒感染是宫颈糜烂的主要原因之一〔1〕。其中，人乳头状瘤病毒(human papilloma virus,HPV)的感染与宫颈糜烂的发生发展直接相关。HPV感染引起的尖锐湿疣（condyloma acuminatum,CA）是以生殖器、会阴和肛门为主要部位的最常见性传播疾病之一。HPV具有高度组织和宿主特异性。生殖器HPV感染有临床感染、亚临床感染和潜伏感染。临床常见的CA即为临床感染的表现，症状隐匿的亚临床感染病变不典型，需借助阴道镜检查及醋酸白试验来发现和诊断，而此型更具传染性，医学研究表明，宫颈HPV亚临床感染与宫颈癌的发生关系密切〔2〕。为了解吉林地区子宫颈糜烂患者HPV感染及基因类型分布，本研究采用免疫组化法和PCR技术对454例子宫颈糜烂患者感染HPV基因类型进行检测。现将结果报告如下。
　　1  对象与方法
　　1.1  临床资料
　　取自2004年1月～2006年8月期间吉林市区三级甲等医院妇科门诊确诊宫颈糜烂患者454份标本。临床症状：白带增多，呈淡黄色脓性或带有血性，伴有腰骶酸痛及盆腔下坠痛和痛经。妇科检查：阴道分泌物多，宫颈呈不同程度的糜烂。112例女性患者在阴道镜下可见外阴、阴道及肛门周围出现大小不等、数量不一的乳头瘤状、菜花状或鸡冠状增生物；其中85例疣体位于外阴及阴道壁等处，27例在宫颈口出现疣体；醋酸白试验后可见增生物变白，乳头直立，基底融合，久不消退，符合CA诊断标准〔2〕。342例没有阴道镜可见的疣体。年龄18～72岁，平均32.1岁，病程2 d～2月，平均27 d。受检取材者均在15 d内未用抗HPV药物。
　　1.2  试剂
　　TaqDNA聚合酶（5u/μl）、dNTPs（大连TaKaRa公司）。链霉素抗生物-过氧化物酶(SP)超敏试剂盒和二氨基联苯胺(DAB)显色试剂盒（福州迈新生物技术开发有限公司）。人乳头瘤病毒（HPV通用型）单克隆抗体（美国CHEMICON公司）。
　　1.3  取材方法
　　外阴常规消毒，放入阴道窥器，将棉拭子(或刮板)沿宫颈鳞-柱上皮交接处顺时针旋转2～3圈，涂布在经多聚赖氨酸处理过的载玻片上，干燥，放入100%丙酮，4℃固定10 min；涂布后的棉拭子置于1 ml生理盐水混匀，置于-80℃冰箱保存。疣体活组织用血管钳摘取适量，放置保存液保存，用于组织病理学检查。
　　1.4  免疫组化法检测HPV
　　采用亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法（avidin biotin peroxidase complex，ABC）检测宫颈糜烂感染HPV。按试剂盒方法操作进行，判断标准为HPV定位于胞核，胞核染为棕黄色为阳性。
　　1.5  PCR检测HPV-DNA类型
　　1.5.1  引物设计
　　根据GenBank公布的HPV-DNA序列，设计12对HPV分型特异性引物，由大连TaKaRa公司合成。
　　1.5.2  DNA模板的制备
　　将标本从-80℃冰箱内取出转移至1.5 ml Eppendorf管中，挤干棉拭子中的水分，10 000 r/min离心5 min，弃尽上清，在沉淀中加入50 μl DNA提取液充分混匀，100℃水浴10 min，10 000 r/min离心5 min，取上清2 μl进行PCR反应。
　　1.5.3  PCR反应
　　在50 μl反应体系中，加入Buffer、dNTPs、引物、Taq-DNA聚合酶、模板等，经40个循环后取10 μlPCR产物与2 μl缓冲液混匀，在20 g/L琼脂糖凝胶中电泳30 min，紫外线灯下观察结果，出现与阳性对照平行的DNA带为阳性。
　　1.6  统计分析
　　采用SPSS软件进行分析。
　　2  结  果
　　2.1  CA疣体组织病理学诊断
　　112例CA发生于会阴、阴道前庭、宫颈及肛门周围，呈菜花状、丘疹样、扁平头斑块状的生殖器疣，呈外向性生长，增生的乳头小而密集，表层细胞有角化不全或过度角化；基底层和棘细胞层增生，表皮浅层或浅中层可见有特征性的灶性分布的核周空穴细胞。
　　2.2  免疫组化法检测2组宫颈糜烂感染HPV阳性率
　　CA组HPV阳性率为67.8%，非CA组HPV阳性率为47.7%(χ2=13.8，P<0.005)，差异有统计学意义。
　　2.3  PCR技术检测2组宫颈糜烂感染HPV类型及分布
　　CA组宫颈感染HPV阳性率：Ⅰ°55.5%（17/32），Ⅱ°64.7%（24/38），Ⅲ°83.3%（42/35）。非CA组宫颈感染HPV阳性率：Ⅰ°32.8%（17/116），Ⅱ°49.6%（60/121）。 Ⅲ°62.3%（65/105）。HPV-DNA分型：HPV-6为16.3%（74/454）、HPV-11为12.1%（55/454）、HPV-16为9.5%（43/454）、HPV-18为7.5%（34/454）、HPV-33为5.3%（24/454）、HPV-45为4.0%（18/454）、HPV-58为3.7%（17/454）。
　　3  讨  论
    本研究结果显示，CA组的阳性率为67.8%，无CA组的阳性率为47.7%，2组感染率明显高于研究报道中HPV在正常宫颈组织中的阳性率10%～30%〔3〕，说明HPV感染与宫颈糜烂关系密切。HPV在正常妇女中有一定比例的感染率，其原因可能是HPV对正常细胞的感染为隐性感染，不一定导致细胞病变或病变太小，以至无法辨别。
    目前已分出100余种HPV-DNA，其中30多种与宫颈感染和病变有关。宫颈HPV感染常发生在宫颈上皮移行区，此区域易发生鳞-柱异位病变致宫颈糜烂，HPV常通过微小糜烂面感染宫颈储备细胞或化生上皮〔3〕。根据其致病力的大小可分为高危型和低危型。HPV 6.11型主要引起皮肤黏膜的疣样病变，与CA的发病有关；而HPV 16.18型，主要引起上皮细胞的恶变，与宫颈癌的发病有关〔4〕。HPV-DNA基因型在不同国家、地区的检出率不同，与地区、人群差异有关〔5〕。本地区454例宫颈糜烂患者宫颈感染以HPV低危型6和11型为主，分别为16.3%和12.1%。高危型16，18，33，45，58型分别为9.5%，7.5%，3 5.3%，4.0%，3.7%。
    流行病学研究表明，宫颈糜烂是宫颈癌的高危因素之一〔6〕，但糜烂与癌变的关系却不明确。HPV的短暂感染并不引发恶性病变的发生，数年乃至数十年的持续感染方能诱生癌变。说明HPV对细胞的致癌作用需要一个漫长的积累过程，HPV对细胞的转化是其他因素作用积累过程的前提〔6〕。我国由于年轻妇女性传播疾病发病率的增高，宫颈病变的发生率也在上升。及时治疗宫颈糜烂可有效地遏制其癌变。因此，临床上针对不同程度的糜烂选择治疗方法时，必须考虑加强宫颈糜烂患者HPV的检测，早期给予抗病毒治疗。
    女性HPV感染发生的高危因素与性行为特别是多个性伴侣有关，与吸烟及口服避孕药有关，可使妇女发生HPV相关肿瘤的机率增加〔7〕。要加强生殖健康教育，对女性HPV感染高危人群加强检测，定期复查，早期诊治，积极治疗，可预防生殖道肿瘤的发生〔8〕。
【参考文献】
  　　〔1〕Cruickshank MZ.The role of human papillomavirus in risk management［J］.Gynaecol Practice,2003,3:229-233.

　　〔2〕Bosch FX,Manos MM,Manoz N,et al.Prevalence of human papillomavirus in cervical cancer:a worldwide perspective［J］.J National Cancer Insti,2003,95(10):199.

　　〔3〕Herrero R,Castle PE,Schiffman M,et al.Epidemiologic profile of type-specific human papilloma virus infection and cervical neoplasia in guanacaste ［J］.J Infect Dis,2005,191(11):1796-1807.

　　〔4〕李安信，尹锐，钟白玉，等.人乳头瘤病毒感染检测及其临床意义［J］.中华实验和临床病毒学杂志，2006，20（2）：49-51.

　　〔5〕Munoz N.Epidemiologic classification of human papilloma virus types associated with cervical cancer［J］.N Engl J Med,2003,348(6):518-527.

　　〔6〕Hernadi Z,Gazdag L,Szoke K,et al.Duraton of HPV-associated risk for high grade cervical intraepithelial neoplasia［J］.Eur J Obstet Gynecol Reprod Biol,2006,125(1):114-119.

　　〔7〕Rocha-Zavaleta L,Yescas G.Human papilloma virus infection and cervical ectopy［J］.Int J Gynaecol Obstet,2004,85:259-266.

　　〔8〕王阳，赵晶.人乳头瘤病毒感染与宫颈癌发生关系的探讨［J］.中国公共卫生，2002，18（11）：1333-1334.