生殖器疱疹的诊断主要依赖临床表现。鉴于国内各大防治机构实验室诊断存在不统一，现推荐中国/殴盟项目管理方法如下：简易的实验室诊断可通过直接从水疱和溃疡底部取材作Tzanck试验检查(Wright染色或Giemsa染色)检查，显微镜下是否有典型的多核巨细胞或核内病毒包涵体。其它实验室诊断包括病毒培养、抗原检查、细胞学检查以及电镜检查等方法。培养及电镜检查的方法对实验条件及技术要求很高，因此目前仅推荐在中心一级的专门实验室中进行。血清学检测用于流行病学调查及同顾性诊断单纯疱疹病毒的原发感染有一定意义，但方法比较繁琐，因此不予推荐。

　　1.标本收集

　　(1)疱疹：用结核菌素注射器和26号针头从成熟的小疱中抽取液体，注入到含有2ml病毒运送液f或Ha。k。液)的小瓶中，或者刺破后用棉拭或涤纶拭子取样，并将拭子头剪断放入装有2ml病毒运送液的小瓶中。

　　(2)溃疡：先将溃疡表面痂皮或污物去除，再用涤纶拭子擦拭或刮取溃疡的基底部和未愈合部位.尤其是病损边缘部位，并将拭子剪入2ml病毒运送培养液中或涂片作组织病理染色或直接免疫荧光检查。

　　(3)宫颈损害：怀疑女性宫颈生殖器疱疹感染时，取材前不要使用任何润滑剂或消毒剂。用棉拭或刮匙在宫颈可疑损害部位用力擦拭或刮取，送检，作病毒培养或作抗原检测。多个部位，如宫颈、阴道、阴唇同时取材比单一部位取材好。24小时内接种的标本可置4℃冰箱，如当天不能接种，应置低温冰箱(一70℃)保存。

　　(4)注意事项：无论是原发感染还是复发感染，从溃疡开始出现到完全愈合一般需要10～20天时间，病毒释放的高峰时间在原发感染为发病期的8～10天、在复发感染为4～6天。因此，取样应尽可能取疱液和溃疡才能提高培养和涂片检测的阳性率。

　　2.细胞学检查

　　原发性生殖器疱疹感染，细胞学检查更易成功，感染早期取材效果较佳。皮肤病损比黏膜处更易获得阳性结果。典型的细胞病理变化为多核巨细胞，细胞核多位于周边，但并不相互重叠，细胞中央有一嗜伊红区。有些细胞核内有包涵体(嗜伊红)，包涵体周边有一晕圈。巨细胞病毒感染及腺病毒感染时，也可产生包涵体.但无多核细胞。细胞学检查染色的方法如下：

　　(1)采集标本后，将取材轻轻涂在一洁净的载玻片上。

　　(2)固定皮肤黏膜取材，用甲醇固定5分钟。宫颈部取材，用95％乙醇固定15～60分钟。

　　(3)染色皮肤黏膜的标本，可采用Tzanck涂片检查法，用姬姆萨染液或姬姆萨一瑞氏染液染5～30分钟后，用流水轻轻冲洗。待干。宫颈部位的取材，可采用PapanicoLaou染色法。

　　3.抗原检测

　　直接免疫荧光抗体检测或免疫荧光试验(IFA)或酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HSV抗原。

　　(1)用无菌棉拭用力擦拭水疱或溃疡的基底部，尽量取得有细胞的组织液。

　　(2)涂片，室温干燥。

　　(3)一20℃的丙酮或甲醇固定15分钟，自然干燥。

　　(4)滴加FITC标记的HSV一1或HSV一2单克隆抗体，置湿盒37℃孵育30～45分钟。

　　(5)用pH7.4的PBS浸洗三次，每次10分钟，洗去没有结合的抗体。然后用蒸馏水清洗15分钟。干燥后加封片，荧光显微镜检查(在495nm波长下检测)。

　　(6)结果观察阳性结果时多核细胞内可见到发苹果绿色荧光的病毒包涵体。

　　(7)临床意义如查到病毒包涵体则有助于诊断，此方法敏感性仅为50％～90％。

　　4.病毒培养

　　常用的细胞有猴肾细胞、兔肾细胞、人胚肺成纤维细胞、HeLa细胞和Hep一2细胞。细胞长成良好单层备用。培养后用免疫荧光法对培养物进行鉴定。

　　(1)准备单层细胞：首先将已生长的细胞系用胰蛋白酶消化，用含10％的胎牛血清的生长培养基制备成每毫升6-8xl04细胞的混悬液，用1N的盐酸溶液调节pH值至7.0。然后分装至带盖的试管中，每管lml。将试管放人37℃培养2天后，即可长成融合良好的单层细胞。

　　(2)标本接种：接种前吸去单层细胞培养管内的培养液，将待检标本摇匀(在病毒运送培养液中)，每个待检标本接种1～2管，每个单层细胞培养管中接种待检标本0.3～0.5ml，37℃孵育1小时，将病毒吸附到细胞上做2个楞胞培养。加入含2％胎牛血清的培养基，37℃孵箱培养。对于阴道、尿道以及脑积液标本，应每隔24小时更换培养基。

　　(注：所有待检标本均应保留部分标本，以便在培养污染或操作失误时备用)

　　(3)培养及观察细胞变化，应观察细胞变化：75％的培养物典型的细胞病变(CPE)在2天内出现，出现的快慢取决于标本中病毒的含量和毒力。病变表现为胞浆内出现颗粒，细胞肿胀、气球样变，有巨细胞或融合细胞出现。完整的单层细胞层中间出现无细胞生长的空白区域，细胞变得不连续。阴性结果应观察至第5天方可判断为培养阴性。

　　(4)传代：至少50％以上细胞出现CPE后，收集培养物，再次接种新鲜传代细胞。当培养至50％细胞出现CPE时将感染细胞用吸管吹下来，以2009离心10分钟，弃上清，用含2％的胎牛血清的1mLpH7.2的PBS将细胞混悬。

　　(5)检测：取251xL细胞悬液滴于载玻片上，按常规lmlpH7.2方法制成涂片、空气干燥，丙酮固定。用荧光标记的单抗，以直接或间接免疫荧光染色分析，荧光显微镜下观察结果。

　　(6)结果观察：以荧光标记的单克隆抗体对固定后的细胞染色，镜检时如病毒培养阳性，则细胞发出苹果绿色荧光;病毒培养阴性，则细胞复染成橙红或暗红，不带任何荧光。

　　(7)临床意义：病毒培养为HSV检测的“金标准”，对病毒分离敏感、特异。根据典型的细胞病变特征即可初步报告为“HSV分离可疑”，当用染色或直接免疫荧光抗体检测证实后可报告“HSV培养阳性“。

　　(8)注意事项：①病毒对不同细胞的敏感性不同，因此应选择敏感细胞进行病毒培养，而且细胞应是生活力强的幼龄细胞。②标本收集后应尽快接种，不能在当天接种的标本应保存于一70％低温冰箱。③培养细胞出现CPE，并非HSV感染的特有的现象，例如CMV、水痘一带状疱疹病毒等病毒培养中，可出现同样的病变，但通过临床症状、选用不同的细胞系培养，即可加以区分，如Hsv可在Hela、BHK、兔肾细胞中生长，而CMV却不能在这些细胞中生长。

　　5.标本运送

　　取样后的标本若不能立即进行检查，尽可能地将标本洗进运送液中，弃去拭子，置冰浴送检。

　　6.标本保存

　　标本洗于运送液中，置于一70℃冰箱保存。

　　7.血清学方法

　　标准的补体结合技术不能区别HSV一1和HSV一2抗体，但更特异的方法如用HSV—l糖蛋白和HSV一2糖蛋白以酶免疫或放射免疫测定，可以区分HSV一1和HSV一2抗体。血清学方法可用于血清流行病学调查，估计人群的感染，但不能用作临床诊断。HSV抗体滴度由阴性变为阳性时可证明HSV的原发感染，但在复发时血清抗体滴度并不升高。