ACTH刺激试验有以下​四种方法：1、1小时法：试验前测定血浆ACTH、血皮质醇的水平作为对照，静脉注射人工合成的ACTH1-24，再测定30分钟、60分钟的血浆皮质醇水平；2、8小时法：测试前24小时尿17-OHS、血浆皮质醇的水平，将ACTH1-24溶于500ml的5%葡萄糖生理盐水，由上午8点持续静脉滴注8个小时。也可以改用纯化的小牛ACTH，或长效的ACTH肌肉注射，测试当日和第二天24小时尿17-OHS，以及30分钟、60分钟的8小时血浆皮质醇；3、2天法：将8小时法连续2天内实施；4、3-5天法：将8小时法在连续3-5天内实施。通过ACTH兴奋试验，也称为刺激试验，有助于了解肾上腺皮质储备功能，是原发性肾上腺皮质功能减退症的确诊试验。